高效液相色谱仪反相色谱柱是保存在乙腈中，新柱应先用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱，一定确保分析样品所使用的流动相与乙腈－水互溶。每天用足够的时间以流动相平衡色谱柱，会在处理问题方面获得较大的“补偿”，而且色谱柱的寿命会变得更长。

平衡操作步骤：

1、平衡开始时，将流速缓慢提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线。缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，需要较长时间来平衡。

2、如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡”。即每天分析开始前，必须先用纯水冲洗30min以上，再用缓冲盐流动相平衡。分析结束后，必须先用纯水冲洗30min以上，除去缓冲盐之后，再用甲醇冲洗30min保护色谱柱。