高效液相色谱仪的正确使用和科学保养：

一、保持贮液瓶清洁。对推荐贮液瓶应定期清洗，用试剂瓶作贮液瓶时要经常更换。

二、定期（如半个月）在4～6M稀硝酸溶液中超声清洗过滤器，保持过滤器畅通无阻。

三、使用HPLC级试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所用溶剂的截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02µm滤膜过滤），流动相一定要脱气。

四、每天开始使用仪器前，注意放空排气，确保泵头、流动池和其它流路系统中无气泡存在。

五、避免色谱柱突然产生大的波动，如泵启动过速、升压过快和进样阀搬动过慢造成的柱压大的波动。

六、采用保护柱，延长柱寿命。如果污染物堆积于保护柱内，造成柱压升高，柱效下降，峰形变差时，卸下保护柱用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。

七、避免超负荷进样，对Φ4.6×250mm色谱柱，绝对进样量应不超过100µg。在灵敏度允许的前提下，应尽量降低样品浓度，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持色谱柱性能持久良好的重要举措之一。

八、经常用强溶剂冲洗色谱柱，将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇－二氯甲烷（1：1）冲洗，正相柱（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗，时间均不少于1h。

九、做完试验后，及时用适当溶剂冲洗色谱柱和进样阀。尤其是存放时间超过12h的色谱柱和进样阀，一定要用足量的水有效洗净其中的盐类和缓冲液，再用甲醇或乙腈冲洗，并保存在乙腈中。正相柱保存在非极性溶剂中。

十、以硅胶为基质的色谱柱，如C18柱和C8柱等，要控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7。

十一、尽量用流动相溶解样品，避免出现拖尾峰和怪峰，避免样品在系统中由于溶解度降低而析出。

十二、对于阻塞或受伤严重的色谱柱，必要时可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的柱床进行清除、填充和修补。此举措可使柱效恢复到一定程度（80%），有继续使用的价值。

十三、检测器输出与积分仪要匹配，要合理设置参数，如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值和衰减等。将适宜的进样量和合适的参数结合起来，使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。

十四、HPLC分析酸碱性物质时，由于吸附作用（次级保留）使峰拖尾，加入改良剂可大大改善峰形，提高有效度。一般规则是：

1、分析酸性物质时，可加入1%的醋酸。

2、分析碱性物质时，可加入10～20mmol/L的三乙胺。

3、酸碱物质混为一体时，可同时加入1%的醋酸和10～20mmol/L的三乙胺。