高效液相色谱仪分析中，通过向流动相中加入改性剂调节pH值和调节流动相的溶剂极性强度，可以改善分离的选择性。

一、向流动相中加入改性剂调节pH值：

1、抑制溶质离子化：

反相液相色谱中，常向含水流动相中加入酸、碱或缓冲溶液，使流动相的pH值控制在一定数值，抑制溶质离子化，减少谱带拖尾，改善峰形，以提高分离选择性。例如在分析有机弱酸时，常向甲醇－水流动相中加入1%甲酸（或乙酸、三氯乙酸、磷酸、硫酸），抑制溶质离子化，以获得对称的色谱峰。对于弱碱性样品向流动相中加入1%三乙胺，也可以达到同样的效果。

2、调节离子强度：

反相液相色谱中，当被分析物质是易离解的有机物时，随流动相pH值的增加，键合相表面残存的硅羟基和碱的阴离子的亲和能力增强，会引起峰形拖尾并干扰分离，可在流动性中加入0.1%～1%的乙酸盐、硫酸盐或硼酸盐。因为盐效应会减弱残存硅羟基的干扰作用，可抑制峰形拖尾并改善分离效果。但经常使用磷酸盐或卤化物，会造成硅烷化固定相的降解。

通常调节pH值对中性化合物的影响不大，但对带有离子化基团的化合物（如氨基、羧基和羟基等）保留因子影响可达10～30倍，分离度变化明显。但如果使用的流动相中加入了缓冲盐，较好在使用前用纯水过渡。如果缓冲盐或离子对试剂浓度较低，需要较长时间平衡。

二、调节流动相的溶剂极性强度：

1、由强到弱：

一般先用90%的乙腈或甲醇－水或缓冲溶液进行试验，可很快得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。

2、三倍规则：

每减少10%的有机溶剂（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加约3倍，此为三倍规则。调整时注意观察各个峰的分离情况。

3、粗调转微调：

当分离达到一定程度时，应将有机溶剂（乙腈或甲醇）10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。