由色谱仪基本分离方程R =(n2/1/4)×[(α-1)/α]×[k/(k + 1)]可知,改变k、n或α,可改变分离度R。分离度R控制的一般原则如下:
一、若开始k很小,要增大R,则首先应将k调整至1<k<10范围。
调节溶剂强度可改变k。
1、正相色谱:
溶剂极性大,溶剂强度大,洗脱能力强,k小。
2、反相色谱:
溶剂极性大,溶剂强度小,洗脱能力弱,k大。
二、若开始k已在1<k<10范围,但R不大,则应增大n来改善R。
1、选择长柱子(n = L/H)。
2、填料颗粒尽量小。
3、降低流速。溶质传质阻力小,峰扩展小。
4、降低溶剂粘度。
5、提高柱温。
三、若改变k和n都不能增大R,则改变α。
1、流动相:梯度洗脱,适用于极性范围宽的样品。
2、固定相:换柱,改变填料。
3、温度:改变热力学参数。