影响高效液相色谱仪分离度的因素有色谱柱填充性能、流动相和流速等。
一、色谱柱填充性能:
高效液相色谱柱的分离性能由固定相粒度、柱长和柱压降(由柱内径和柱填充状况决定)决定,这三个参数度也决定了样品组分的保留时间。保留时间不仅与色谱过程的热力学因素k有关,还与决定柱效和分离度的柱性能参数及流动相的粘度有关,这些参数都是影响色谱分离过程动力学的重要因素。
在高效液相色谱中,色谱柱的制备是一项技术要求非常高的工作。
二、流动相:
高效液相色谱中,改变淋洗液组成和极性是改善分离的较直接因素,不可能通过增加柱温来改善传质。因此,高效液相色谱大多是恒温分析。流动相选择在高效液相色谱中显得特别重要,流动相可显著改变组分的分离状况。
三、流速:
流速大于0.5cm/s时,H-u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速,柱效提高不是很大。但在实际操作中,流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要参数。