极性键合相色谱仪固定相是由键型、主体基团和极性端基构成的键合相。
一、组成:
1、键型:
键型是整个极性键合基团与硅胶母体直接相连的桥梁。如Si-O-Si-C或Si-O-Si-N。
2、主体基团:
为直键烃基或醚基。使硅胶表面与特定的极性基团之间保持一定距离。
3、极性端基:
为极性基团。如氨基(-NH2)、氰基(-CN)、硝基(-NO2)和二醇基。
二、类型:
氨基、氰基、芳硝基、二醇基和醚基键合相可用作正相色谱,主要以氢键力与溶质相互作用,氢键力大小顺序为氨基>氰基>芳硝基>二醇基>醚基。
1、氨基键合相:
氨基键合相是将氨丙硅烷基键合在硅胶上制成的。
氨基键合相兼有质子接受体和给予体的双重性能,具有强极性。
对具有较强氢键作用力的样品,显示强的分子间相互作用,k值较大。
氨基具有碱性,可在酸性水溶液中作为弱阴离子交换剂,用于分离酚、羧酸和核苷酸。
氨基用作反相固定相可与糖分子中的羟基作用,广泛用于单糖、双糖和多糖的分离。
氨基柱不可用于羧基化合物(如甾酮和还原糖等)的分离。
2、氰基键合相:
氰基键合相是将氰乙硅烷基键合在硅胶上制成的。
氰基键合相为质子接受体,具有中等极性,分离选择与硅胶类似,但比硅胶的保留值低。
对酸性、碱性样品可获得对称的色谱峰。
对含双键的异构体或双键环状化合物具有良好的分离能力。
与氨基键合相比较,k值小。
3、芳硝基键合相:
芳硝基键合相具有电子转移功能,呈弱极性,对芳香族化合物和多环芳烃有良好的分离选择性。
4、二醇基键合相:
二醇基键合相呈弱极性,可分离有机酸和甾体,也可用作分离蛋白质的凝胶色谱的固定相。
5、醚基键合相:
醚基键合相呈弱极性,可分离形成氢键的化合物(如酚类和硝基化合物),也可用作分离蛋白质的凝胶色谱的固定相。