高效液固吸附色谱仪常用固定相有硅胶、氧化铝、活性炭和聚酰胺等。
一、硅胶：
硅胶通式为SiO2•XH2O，具有多孔性硅氧烷交联结构。由于其骨架表面具有很多游离和键合活性状态硅醇基团，能通过氢键与极性或不饱和分子相互作用。硅胶的吸附能力与硅羟基数量有关。硅胶随着含水量的增加，其活性降低，若硅胶游离水达到17%时，其吸附能力极低。
色谱用硅胶应该是中性无色颗粒，但是由于制造过程常接触强酸，故在实验前一般要检查酸性，不低于pH = 5才可使用，而且使用前一般在120℃烘24h活化。
硅胶柱色谱适用范围广，适用于非极性和极性混合物的分离。
二、氧化铝：
氧化铝是由Al（OH）3直接在约600℃高温下脱水制得，主要为γ～Al2O3，有中性、酸性和碱性三种。
中性氧化铝适用于醛酮、萜类及对酸碱不稳定的酯和内酯有机物的分离。
酸性氧化铝适用于有机酸、酸性氨基酸和酚类物质的分离。
碱性氧化铝分离植物中碱性成分（如生物碱）颇为理想，也适用于萜类、甾体和强心苷等分离。
氧化铝的活性与含水量关系极大，在一定温度下除去水分，可使氧化铝活化，加入一定量水即可使活性改变。氧化铝的活化比硅胶所需的温度要高的多，因而需要在高温炉中进行，常规的烘箱不能完成对氧化铝的活化。
硅胶和氧化铝均为极性吸附剂，有以下特性：
对极性物质具有较强的亲和能力。同为溶质，极性强者优先被吸附。
溶剂极性越弱，吸附剂对溶质的吸附能力越强。溶剂极性增强，吸附剂对溶质的吸附能力随之减弱。
溶质即使被硅胶和氧化铝吸附，一旦加入极性较强的溶剂，就被后者置换洗脱下来。
三、活性炭：
活性炭的吸附作用与硅胶和氧化铝相反，对非极性物质具有较强的亲和力，水溶液中吸附较强，有机溶剂中较弱。在一定条件下，对芳香化合物的吸附力大于脂肪族化合物，对大分子量化合物的吸附力大于小分子量化合物。利用这些吸附性能差别，可将水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开，单糖与多糖分开，氨基酸与多肽分开。
四、聚酰胺：
聚酰胺是通过酰氨基聚合而成的一类高分子化合物，可与酚类、酸类、醌类和硝基化合物等形成氢键结合而被吸附，而使这些有机物与不能形成氢键的化合物分离。
主要用于酚类黄酮体和蒽醌等有机物的分离。
