根据高效色谱仪塔板理论，有效理论塔板数n有效是衡量柱效能的指标，表示样品组分在高效色谱仪色谱柱内的分配次数。但样品中各组分，特别是难分离物质对（即物理常数相近，结构类似的相邻组分）在一根色谱柱内能否得到分离，取决于各组分在固定相中分配系数的差异，也就是取决于固定相的选择性，而不是分配次数的多少。柱效能不能说明难分离物质对的实际分离效果，选择性无法说明柱效率的高低。因此，必须引入一个既能反映柱效能，又能反映柱选择性的指标，作为色谱柱的总分离效能指标，来判断难分离物质对在色谱柱中的实际分离情况，这一指标就是分离度R。
分离度R是相邻两组分色谱峰的保留时间之差与两组分色谱峰峰底宽度平均值的比值。即：
R = 2（tR2－tR1）/（W1+W2）
式中：tR为组分的保留时间，W为组分的色谱峰峰底宽度。
1、R = 0.8：相邻两峰的分离程度达89%
2、R = 1：相邻两峰的分离程度达98%
3、R = 1.5：相邻两峰的分离程度达99.7%
4、R > 1.5：相邻两峰的基线分离，相邻两峰完整分离。
由于分离度R总括了实现组分分离的热力学（即峰间距）和动力学（即峰宽）两方面因素，定量地描述了混合物中相邻两组分实际分离的程度，因此，用它作为高效色谱仪色谱柱的总分离效能指标。
