色谱仪分离度方程为R =（n2/1/4）×[（α－1）/α]×[k/（k + 1）]
式中：n2/1/4为柱效项，（α－1）/α为柱选择项，k/（k + 1）为柱容量项。
改善色谱仪分离度的一般原则是增加△tR和减小谱带宽度W。
一、增加△tR：
即增加相邻组分保留时间的差值：
1、增加柱长：
对于长度不同的同一种色谱柱：
R2/R1 =（n2/n1）1/2 =（L2/L1）1/2
式中：L1、L2分别为两根色谱柱的长度。
可见，增加色谱柱长度，理论塔板数会增加，可提高分离度。
2、增加固定相的量：
增加固定相的量，k增加，柱容量项增加，分离度增加。
3、选择分离因子较大的色谱条件：
（1）降低柱温：
气相色谱中常用。
在气相色谱中，㏑α= 2.13/（RTc）×（Tb2－Tb1）+ c
式中：Tc为柱温，Tb1和 Tb2 分别为组分1、2的沸点，c为常数，R为热力学常数。
可见，降低柱温，分离因子增加，柱选择项增加，分离度增加。
（2）选择不同的固定相：
填充柱气相色谱中常用。
（3）选择不同的流动相：
高效液相色谱中常用。
二、减小谱带宽度W：
1、提高柱效，减小塔板高度：
使用填料颗粒更细、更均匀的填充色谱柱。
2、减小色谱仪的死体积：
如在填充经典的制备柱时，经常采用湿法装柱。柱子装好后一般要在流动相流动的情况下给出足够的时间让固定相沉降，等固定相不再沉降后才能上样品。
3、进样量：
防止色谱柱超载。
