液液分配色谱仪是基于样品组分在固定液和流动相之间分配系数不同实现分离的。
一、固定相：
液液分配色谱的固定相为涂渍在载体上的固定液。
1、载体：
理想的载体应孔容大，孔径为10～50nm。孔径太小，较大的分子可能被完整排阻，而保留时间短，分离不佳。孔径太大，固定液易流失，柱稳定性差。由于毛细管作用，固定液在小孔要比大孔内保持的好。
原则上所有多孔性的吸附材料均可作为固定液的载体。常用的有硅胶和硅藻土等，主要采用表面多孔微珠和全多孔微粒。
（1）表面多孔微珠：
柱效好，分析时间短。但多孔层很薄，只能涂渍少量固定液（较大涂渍1%～2%），柱容量低，柱稳定性差，因为少量的固定液流失将大大改变保留体积。
（2）全多孔微粒：
孔容大，可涂渍较多的固定液，涂渍量可达1克固定液/每克载体（称为100%涂渍），柱效高，柱容量高，柱稳定性好。
载体上涂渍的固定液越多，因固定液流失对样品保留体积的影响越不显著。
2、固定液：
由于流动相参与选择竞争，因此对固定液的选择比较简单，只需使用几种极性不同的固定液即可解决分离问题。
为了更好解决固定液在载体上的流失问题，产生了化学键合固定相。目前约有3/4以上的分离问题是在化学键合固定相上进行的，是应用较广泛的一种固定相。
二、流动相：
液液分配色谱的流动相一般采用与固定液性质相差很大的不混溶的溶剂为流动相，流动相对固定相的溶解度尽可能小，因此固定液和流动相的性质往往处于两个极端。例如当固定液是极性物质时，所选用的流动相通常是极性很小的溶剂或非极性溶剂。
流动相使用前需预先用固定液饱和或在分析柱前增加预饱和柱，以避免固定液流失。
