高效液相色谱仪所用的固定相颗粒极细,对流动相阻力很大,为使流动相较快流动,必须配备高压输液系统。高压输液系统由储液罐、高压输液泵、过滤器和压力脉动阻尼器等组成,其中高压输液泵是核心部件。
一、高压输液泵要求:
1、泵体材料耐腐蚀。
2、输出流量稳定,重复性高,输出流量范围宽。
3、泵腔体积小,以便快速更换溶剂。
4、压力平稳,无脉冲。
5、能在高压下连续工作。
二、高压输液泵类型:
1、恒流泵:
在一定操作条件下,输出流量保持恒定而与色谱系统阻力变化无关。
恒流泵又称机械泵,分机械注射泵和机械往复泵,其中机械往复泵应用较多。
2、恒压泵:
能保持输出压力恒定,但输出流量随色谱系统阻力的变化而变化,保留时间重视性差。
目前,恒流泵正逐渐取代恒压泵。
三、梯度洗脱:
1、线性梯度:
在某一段时间内连续而均匀地增加流动相强度。
2、阶梯梯度:
流动相强度从低强度直接改变为较高强度。
3、高压梯度:
利用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。两种溶液在高压下混合。
(1)优点:通过梯度程序控制器控制每台泵的输出,能获得任意形式的梯度曲线,而且精度很高,易于实现自动化控制。
(2)缺点:使用了两台高压输液泵,成本高,故障率相对较高,而且只能实现二元梯度洗脱。
4、低压梯度:
使用一台高压输液泵,通过比例调节阀将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压输液泵中,溶液在常压(低压)下混合。
(1)优点:使用一台高压输液泵,成本低;能实现二元以上梯度洗脱。
(2)缺点:常压下混合往往容易形成气泡,通常需要配置在线脱气装置;浓度梯度范围较高压梯度窄。