高效液相色谱仪化学键合固定相的制备包括硅胶预处理、试剂与溶剂预处理、衍生化反应和端基封尾等。
一、硅胶预处理：
1、酸处理：
用0.1mol/L的盐酸在90℃下浸泡24h，或以10%的盐酸在回流状态处理8h。
2、中和：
水洗至无Clˉ，经酸处理后的硅胶表面的羟基浓度已达到理论值8μmol/m2左右。
3、干燥：
在200℃以下真空烘干除去物理吸附水，注意不得超过200℃，否则，硅醇基会脱水形成硅氧烷。
二、试剂与溶剂预处理：
1、硅烷化试剂对水很敏感，有机溶剂、硅烷化试剂和玻璃仪器在使用前必须进行干燥。
2、溶剂常以蒸馏方式进行纯化或以玻璃棉将其中的悬浮物滤去。
三、衍生化反应：
1、Si－O－C键型：
酯化反应是较早用于制备键合相的反应。
用硅羟基Si－OH和醇类R－OH通过酯化反应制得单分子层硅酸酯易水解，醇解，热稳定性差，现已不大使用。
2、Si－N或Si－C键型：
比Si－O－C键型键合相水解稳定性和热稳定性好，但适用PH值范围窄（PH = 4～8），实用价值不大。
3、Si－O－Si－C键型：
由硅羟基与硅烷化试剂反应制得的键合相具有良好的热稳定性和化学稳定性，能在PH = 2～8的介质中使用，目前占绝对优势。
四、端基封尾：
用氯化三甲基硅烷等试剂与键合相硅胶表面的残留硅醇基反应，将残留硅醇基封锁起来。
