化学键合相色谱仪键合固定相是利用化学反应将有机分子通过共价键键合在载体表面上，形成均一、牢固的单分子液膜而构成的固定相。
一、键合固定相的分类：
载体几乎都用硅胶。
1、疏水基团：不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基等。
2、极性基团：氨丙基、氰乙基、醚和醇等。
3、离子交换基团：作为阴离子交换基团的胺基、季镀盐和作为阳离子交换基团的磺酸等。
二、键合固定相的制备：
1、硅氧碳键型键合固定相（硅酸酯型）（≡Si－O－C）：
较先用于液相色谱仪的健合固定相。
用醇与硅醇基发生酯化反应制备。
此类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性。但这些酯化过的硅胶易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相。
2、硅氧硅碳键型键合固定相（≡Si－O－Si－C）：
目前应用较广泛的键合固定相。
将硅胶与有机氯硅烷或烷氧基硅烷反应制备。
此类键合固定相具有相当的耐热性和化学稳定性，在PH=2～8.5范围内对水稳定，有机分子与载体间的结合牢固，固定相不易流失。
例：十八烷基硅烷键合固定相（简称ODS或C18）是较常用的非极性键合固定相，用于反相色谱，在70℃以下和PH= 2～8范围内可正常工作。
3、硅碳键型键合固定相（≡Si－C）：
将硅胶表面氯化后，使Si-Cl键转化为Si－C键，有机基团直接键合在硅胶表面上。此反应不方便。
当使用水溶液时，必须限制PH=4～8范围内。
4、硅氮键型键合固定相（≡Si－N）：
将硅胶表面的羟基先转化成卤素（氯化），再与各种有机胺反应，可得到各种不同极性基因的键合固定相。
可用非极性或强极性的溶剂作为流动相。
