根据流动相所起的作用，高效液相色谱仪流动相可分为底剂和洗脱剂。底剂决定基本的色谱分离情况，洗脱剂是为了调节样品组分的滞留并对某几个组分具有选择性的分离作用。流动相又称洗脱剂、淋洗液、展层剂或溶剂。
一、流动相选择的一般要求：
1、流动相的纯度。
2、流动相与固定相不互溶，不发生化学反应。
3、对样品要有适宜的溶解度。
4、必须与检测器匹配。
5、溶剂的粘度要小，以降低色谱柱的阻力。
二、常用溶剂的极性顺序：
水＞甲酰胺＞乙腈＞甲醇＞乙醇＞丙醇＞丙酮＞二氧六环＞四氢呋喃＞甲乙酮＞正丁醇＞乙酸乙酯＞异丙醚＞二氯甲烷＞氯仿＞溴乙烷＞苯＞二硫化碳＞环己烷＞己烷＞煤油。
三、流动相的选择：
1、化学键合相色谱：
（1）正相键合相色谱：
常用非极性溶剂，样品组分的保留值可加入适当的有机溶剂（调节剂）调节。
常用溶剂：氯仿、二氯甲烷、已腈和醇类等。
（2）反相键合相色谱：
多以水或无机盐缓冲液为主体，再加入一种能与水相溶的有机溶剂调节，如甲醇、乙睛和四氢呋喃等。
2、离子交换色谱：
离子交换色谱是在含水介质中进行。组分的保留值可用流动相中盐的浓度（或离子强度）和PH值控制，增加盐的浓度，保留值降低。
3、凝胶色谱：
凝胶色谱所用的溶剂必须与凝胶本身非常相似，能润湿凝胶并防止吸附作用。
高分子有机化合物的分离采用的溶剂主要有四氢呋喃、甲苯、间甲苯酚和N，N-二甲基甲酰胺等。
生物物质的分离主要用水、缓冲盐溶液、乙醇和丙酮等。
