高效液相色谱仪进行梯度洗脱时,选定溶剂A、B之后,设定梯度速度和梯度时间,确定梯度曲线形状,要以较经济的梯度洗脱程序,实现样品的优质化分离。影响梯度洗脱的因素有:
1、溶剂的纯度要高,否则会使梯度洗脱的重现性变坏。
2、梯度混合的溶剂互溶性要好,应防止不互溶的溶剂进入色谱柱。
3、注意溶剂的粘度和密度对混合流动相组成的影响。
4、梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择型检测器,而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器。
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